常規標本的採集與處理
臨床化學檢驗中多採用血液為標本,其次為尿液,少數是其他體液(如唾液、腦脊液、胸腹水、羊水等)。標本的化學成分含量可因標本採集和處理不當等因素的影響而發生變化,從而影響測定結果的準確性,囙此,在取標本時要考慮到並設法消除這些因素的影響。
一、血液標本
采血管分普通管、抗凝管和促凝管三類。常用抗凝劑有:枸櫞酸鈉、EDTA-K2或EDTA-Na2、肝素等。根據不同的檢驗項目,選用合適的采血管十分重要。
1.采血部位:
為保證血液檢驗結果的準確性,靜脈采血一般選擇肘前靜脈或正中靜脈,必要時可採用手臂靜脈和踝部靜脈,但要避開皮膚有病變的部位。小兒可採用頸靜脈采血。此外,必要時還可從股靜脈、大隱靜脈、鎖骨下靜脈、臍旁靜脈採集。
2.採集方法:
血糖、血脂、蛋白質、尿酸、無機離子、酶類測定,采血後注入潔淨試管,室溫放置1-2小時後,離心分離血清。纖維蛋白原類測定需用血漿,采血後注入盛有特定抗凝劑的試管中,並立即混勻。
3.採集時:
不要在患者輸液、輸血或靜脈推注某些藥物的一側采血,避免引起某些檢驗數值的過高或過低,應選擇對側手臂肘前靜脈采血。
4.注意事項:
a.不要用錯采血管。
b.采血用針頭不宜過細,以免使血K+升高。
c.采靜脈血時止血帶壓脈時間不宜過長,以免引起血管內溶血。
d.抽取時產生的大量氣泡不要放入試管內,以免引起溶血。
e.不要在病人輸液同側手臂采血,更不能在病人輸液時,通過前端留置針抽血。對於植入留置針的患者,因針管內充肝素抗凝,應儘量採用其他部位采血
f.抗凝管一定要來回顛倒混勻3-5次
g.血清標本應避免溶血,並及時分離血清,如需隔日檢驗,應封口後4℃保存。
h.血氣和pH值測定的血液以動脈血為原則,且不可漏氣。
i.細菌培養的樣品要採用無菌科技取樣,防止污染。
★標本採集後,必須在試管或容器上貼上檢驗申請單號碼、病人姓名,且應當場核對無誤。
二、尿液標本
分為清晨空腹尿、隨機尿、計時尿(2h、3h、12h、24h等)、午後尿、餐後尿、症狀典型時尿等。尿液原則上以不用防腐劑為好,如需12h或24h尿,首選以冷藏為妥,根據不同的檢驗目的加用合適的防腐劑。17羥、17酮、VMA檢測標本必須加濃鹽酸防腐。
三、骨髓
按骨穿要求消毒,請先用相應抗凝劑潤濕針管筒至5ml刻度處後,排出多餘抗凝劑及空氣,再抽取骨髓,按檢測要求需要的抗凝管送檢。4℃保存運輸。標本採集後,必須在試管或容器上貼上檢驗申請單號碼、病人姓名,性別,年齡,是否移植,若移植提供供者性別,臨床診斷,抽取骨髓時的狀態(是否幹抽),且應當場核對無誤。
四、腦脊液
由臨床醫師穿刺採樣,用專用的各種試管或容器保存,及時送檢,4℃運輸標本。
五、胸水、腹水
將抽取物裝入清潔乾燥的空瓶中。必要時加抗凝劑,6小時內送檢。
特殊標本的採集與處理
一、血粘滯度
1.病人準備:
病人需空腹,禁止在輸液後采血。
2. 標本採集:
病人應取坐位、肘前靜脈采血。
3. 類型及量:
一管肝素抗凝血4-5ml,一管枸櫞酸鈉(1:4)抗凝血2ml。
4. 標本保存:
血標本採集後室溫下靜置20分鐘測定,密封容器後室溫(15-25℃)保存,最長不超過4小時。
二、胰島素/C肽
1. 病人準備:
實驗前3日,每日食物中糖含量不低於150克,且維持正常活動,影響實驗的藥物(如:咖啡因、口服避孕藥、水楊酸鹽等)應在3日內停用,實驗前病人應10-16小時不進食。
2. 標本採集:
臨床上常用方法是清晨空腹取血後,再於餐後0.5、1、1.5、2小時各取血1次。
3. 類型及量:
無添加劑管、全血2ml。
4. 標本保存:
2-8℃保存。
三、高血壓RAAS檢測
1. 病人準備:
阻斷劑、血管擴張劑、利尿劑及甾體激素、甘草等影響體內腎素水准,一般要在停藥後2周測定PRA,利血平等代謝慢的藥物應在停藥3周後測定。不宜停藥的病人改服胍乙啶等影響PRA較小的降壓藥。鈉攝入量影響機體水准,故病人測定前3天應適當减少食鹽攝入量,最好同時測定取血前24小時尿鈉含量,以供分析結果時參攷。
2. 標本採集:
肘靜脈取血5ml,迅速分別注入專用抗凝管中,搖勻。
3. 類型及量:
專用抗凝管采血,分離血漿,取2ml送檢。
4. 標本保存:
-20℃低溫冰柜保存,可保存2個月。
5. 注意事項:
a. 抽血要求:提前向本中心領取特殊試管3ml管,保存期一周,4℃保存。臥比特抽血:早晨空腹不起床或平臥2小時,抽血5 ml,取掉針頭後,分別注入特殊試管3ml及肝素抗凝管2ml,輕輕搖勻,勿劇烈震盪,立即4℃保存。立比特抽血:保持站立或走動2小時,抽血方法相同,即刻送檢。
b. 標本未及時分離血漿、反復凍融、溶血、使用過期抗凝管等均可使結果受到影響。
四、性激素檢查
注意事項:
a. 性激素檢查無需空腹。
b. 檢查前至少一月內不能用性激素類藥物(包括黃體酮、雌激素類),否則結果不可靠(治療後需複查性激素者除外)。
c. 瞭解基礎性激素水准,要選擇月經第2-5天檢查,第3天測定最好。
d. 不能肯定陰道流血是否為月經者,應同時檢測性激素6項,以防誤診。
五、染色體疾病優生篩查
注意事項:
1.申請單上務必填寫孕婦年齡、體重、身高、末次月經日期、準確孕周(B超或末次月經計)、采血時間、吸烟狀況、糖尿病胰島素治療情况、單胞或多胞胎,孕婦本人閱讀篩查須知後簽字,否則無法作出風險評估。
2.染色體疾病優生篩查(21三體綜合征、18三體綜合征、神經管缺陷) (AFP、β-HCG)在孕14-22周抽血。
六、高危型人乳頭瘤病毒(HPV)檢測
1. 病人準備:
48小時內不能作陰道沖洗或使用陰道內用藥物;48小時內不能有性生活;檢查前不進行醋酸或碘伏塗抹;月經正常婦女,非月經期採樣檢查,最佳檢查時間為月經來潮後10-18天。
2. 標本採集:
a. 放置陰道張開器暴露宮頸,用棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦去,用專用取樣刷置於子宮頸口與粘膜交界處單方向旋轉4-5圈。
b. 將取樣刷放於專用洗脫管中,在切口處折斷多餘部分。
c. 拧紧盖子,送检。
3. 類型及量:
宮頸刷取物,儘量避免保存液在取樣過程中漏出,否則會因標本量不够而影響檢測。
4. 標本保存:
室溫保存不應超過12小時,2-8℃保存不超過7天,-20℃保存不超過3個月。避免反復凍融。
七、液基超薄細胞學(TCT)檢測
1. 病人準備:
病人在檢查前三天停止性生活,檢查前停止外用藥,並清洗外陰部。
2. 標本採集:
採集標本應用專用採樣器,如果宮頸表面粘液、血液較多者,應先用棉簽輕輕擦淨粘液及血液,將宮頸刷抵住宮頸口,轉動5-7圈。採樣後將取樣刷放入保存液瓶內,在切口處折斷多餘的部分,再擰緊瓶蓋,在瓶身上寫上病人姓名,填寫申請單,送檢。
3. 標本類型:
宮頸脫落細胞
4. 標本送檢與保存:
標本採集後應及時送檢,如不能及時送檢,可放入4℃冰柜內保存。
5. 注意事項:
a. 用取樣器採集標本時,宮頸器前端的長毛刷應插進宮頸管以便採集到宮頸上皮及移行區上皮細胞,採樣時動作應輕柔,用力適中,太大容易損傷宮頸,太小不能採集到足够用於診斷的上皮細胞。
b. 送檢單及標本瓶上應寫清病人姓名,申請單應詳細填寫各項內容,特別是年齡、月經情况、病史摘要及臨床診斷,如有特殊情况及要求請寫明,以便正確診斷。
八、細菌培養標本的採集與處理
1. 病人準備:
病人在採集標本做該項目時至少停用抗生素一周以上。
2.無菌採集:
1.下呼吸道分泌物(痰液):採集晨間第一口痰,應先反復漱口,經深呼吸數次後用力咳痰,不可吐入唾液,4℃冰柜待檢。
2.尿液(中段尿):由護理員協助採取中段尿約3ml入無菌試管中,放2-8℃冰柜保存待檢。
3.膿液:用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液,要儘量多取一些,然後將棉拭子倒懸在無菌試管中。
4.血液:凡懷疑菌血症和敗血症的患者,采血培養中時,應儘量在未使用抗菌素前采血,如已使用抗菌素,應儘量選擇抗菌素在體內濃度最低時采血。成人每次采血5-10ml,小兒采血2-3ml。
**皮膚消毒嚴格執行以下三步法:對碘不過敏的患者①70%酒精擦拭靜脈穿刺部位30 s以上;②1%-2%碘酊作用30s或10%碘伏60s,從穿刺點向外畫圈消毒,至消毒區域直徑達3 cm以上;③70%酒精脫碘。對碘過敏的患者,用70%酒精消毒60 s,待酒精揮發乾燥後采血。
**培養瓶消毒程式:①70%酒精擦拭血培養瓶橡皮塞,作用60 s;②在血液注入血培養瓶之前,用無菌紗布或無菌棉簽清除橡皮塞子表面殘餘酒精。從抽血到接種入瓶,動作迅速,防止血液凝固。 ;標本運送:采血後應該立即送檢,如不能立即送檢,需室溫保存或置35-37℃孵箱中,切勿冷藏。
5.穿刺液(胸腹水、心包液、關節腔液、鞘膜積液):無菌抽取後,注入含肝素的無菌試管中,輕輕填倒試管10餘次,使肝素與穿刺液混勻達到抗凝的目的。4℃冰柜內保存。
6.膽汁:醫生以無菌方法取膽汁10ml注入無菌試管。
7.腦脊液:以無菌方法取腦脊液3-5 ml,置無菌試管內保溫送檢。(無菌試管請自備)
8.陰道、宮頸及攝護腺等分泌物:由臨床醫師採集,收集於無菌試管內送檢。
九、性病培養標本的採集與處理
1.分泌物支原體(解脲支原體)培養+藥敏
支原體對幹、熱抵抗力差,標本採集後應儘快接種於培養基中送檢,室溫可保存8小時;4℃可保存24小時。
男性:用特別細的無菌拭子沾取無菌鹽水少許,深入尿道口內2-2.5cm處取分泌物,採集標本後馬上把拭子插入培養基中送檢。
女性:用沾取少許無菌生理鹽水的棉拭子取宮頸管內口1-2cm單層柱狀上皮細胞,取樣拭子不可碰陰道壁,採集標本後馬上把拭子插入培養基中送檢。
2.分泌物衣原體檢測:
男性患者將拭子插入尿道2-4cm,旋轉3-5秒鐘後取出,將取樣的拭子放入無菌試管中送檢。
女性患者在取樣前先用另外的拭子或棉球將宮頸口外的粘液抹去,再將取樣拭子插入宮頸管內至棉花部分全部插入,旋轉15-20秒取出,不要碰到宮頸外及陰道壁,將取樣後的拭子放入無菌試管中送檢。
標本保存條件:標本採集後在2-8℃保存,24小時內送檢。
3.淋球菌培養+藥敏:
*男性尿道炎急性期患者可用沾有少許生理鹽水的無菌拭子取膿性分泌物。非急性期病人,可用無菌細小棉拭子沾取少許生理鹽水輕輕插入尿道2-4cm深處,轉動拭子,然後取出。
*女性患者先用無菌棉拭子擦去宮頸口分泌物,再用另一沾有生理鹽水的棉拭子插入宮頸口內1cm處旋轉,取出分泌物。
採集標本後馬上把棉拭子插入淋球菌運輸培養基中送檢。
標本保存條件:培養基常溫下不超過24小時送檢。
4.念珠菌培養+藥敏:
病人準備:病人在採集標本前至少停用藥物一周以上。
標本類型:生殖器分泌物。
標本採集:懷疑陰道念珠菌感染需要做培養及做藥敏試驗的患者,可用沾有生理鹽水的棉拭子沾取大量豆腐渣樣白帶或可疑白帶倒置於無菌試管中送檢。
★微生物類檢測及需特殊試管的檢測,請提前通知我中心,以便及時提供相應專用管,儘早送檢。
十、常規細胞學檢查
請詳盡填寫常規細胞學檢查申請單或專用細胞學申請單。
1.胸腹水及心包積液送檢標本應加3.8%的枸櫞酸鈉(按1:10比例)抗凝,夏天應用10%福馬林或95%酒精(按1:10比例)防腐,標本量應在100-200ml為宜。
2.痰液及尿液送檢:痰液應留清晨第一次從肺部深咳的新鮮痰液,避免混入過多唾液、鼻腔分泌物、食物和口水,盛於清潔杯中或蠟質硬紙盒等容器內加蓋送檢,防止標本外溢或外漏。尿液應收集12~24小時尿量為宜,弃去上清液,留取100ml-200ml沉澱液送檢,必要時加防腐劑。另外,痰液、肺泡灌洗液和尿液均可提供專用細胞保存液送檢。
3.腫塊穿刺標本及支氣管刷片等送檢:取材後,均可塗片2-4張,待自然乾燥後直接送檢。另外,甲狀腺細胞針穿刺細胞TBS診斷,可提供專用細胞保存液送檢。
十一、組織病理學檢查標本的採集與處理
一般病理標本處理為:將手術標本離體後快速放入10%中性福馬林浸泡,經過取材、脫水、石蠟包理、切片、HE染色(蘇木素-伊紅染色)、閱片。病理申請單需和標本同時送檢,申請單上詳細填寫病人資訊、病史、標本數量和部位等必要資訊。根據病理診斷的需要,也可選用相應的特殊染色及免疫組化。
1.內窺鏡及穿刺標本
腹腔鏡、支纖鏡、胃鏡、腸鏡等活檢小組織或各臟器穿刺小組織取材後需迅速放入10%的中性福馬林溶液裏固定,否則組織易失水變幹而影響診斷,並注明相應位置,如:胃竇部等。
2.活檢組織取材
a.選擇恰當的取材部位。力求切取病變明顯的組織,如為腫瘤組織,一定要帶有其周圍的正常組織(腫瘤的周邊區可以反映鄰近組織之間的介面情况),如為潰瘍應取潰瘍的周圍及底部組織送檢。
b.採取標本時切忌擠壓和燒灼,取材刀要鋒利,操作要正確,以免組織過度受擠壓,而導致細胞結構、形態嚴重變形而影響診斷,甚至造成不必要的重新取材,給病人造成不必要的痛苦,並且延長診斷時間。
c.宮頸活檢取材後需注明其相應鐘點比特,並分別存放。
d.組織取材後需立即放入10%的中性福馬林溶液裏固定。
3.手術及全器官大組織標本
a.手術切除組織要求全部送檢,並保持標本的完整性(直徑超過5cm的手術標本,可剖開標本而不離斷,保持標本整體結構不被破壞,有助於福馬林浸透全部標本,否則易導致標本內部不能及時固定而變性質溶,影響診斷;如為淋巴結,則需切開後放入容器中),標本離體後需在30min內放入10%的中性福馬林,連同病理申請單一起送檢。
b.盛裝標本的容器,容器入口不能太小,要保證標本不變形及能够順利取出。容器要密封,以免固定液揮發導致濃度不足而影響固定效果。
c.固定液要求浸泡全部組織,使組織固定充分(固定液的量應為標本的5倍以上)。中性福馬林對組織的滲透性强,保存時間長久,固定效果好,儘量避免使用95%的酒精固定,否則會導致組織過度硬化而影響製片和病理診斷。不能用75%酒精或生理鹽水,它們不能用於組織的固定。若有特殊要求,選用特殊固定液。
血液項目標本的採集與處理
一、血液腫瘤檢測常規標本注意事項(PCR、流式、遗传)
1. 某些項目並不嚴格要求送檢骨髓標本的,如由於某些原因只能送檢外周血,則外周血中WBC>;5×;109/L;流式細胞免疫分型無此細胞數限制。
2. 初診的患者,如懷疑為急性白血病、多發性骨髓瘤的,只要外周血中异常細胞或原始細胞達到20%以上,即可用外周血進行流式免疫分型的檢測,達到30%以上,即可進行染色體核型分析及FISH相關項目的檢測和融合基因相關檢測;如懷疑為慢性粒細胞白血病(CML)的患者,只要外周血中有幼稚細胞出現,即可用外周血進行流式免疫分型的檢測。如懷疑為慢性淋巴細胞白血病的患者,可直接用外周血進行流式免疫分型的檢測。流式平臺白血病微小殘留的檢測只能用骨髓進行(特殊情况外周血也可檢測)。
3. 淋巴瘤相關項目的檢測,最好用組織標本,其次用骨髓,不能用外周血送檢(除非確定發生了轉移)。
二、骨髓採集方法
1. 適用於做骨髓細胞學檢測,骨髓核型檢測、分子生物學檢測、細胞化學染色檢測的骨髓標本採集。
2. 操作步驟:
a、部位:骼前上棘穿刺點,在骼前上棘後1-2釐米。髂前上棘穿刺點,位於骶椎兩側,臀部上方突出的部位。胸骨穿刺點,位於胸骨柄或胸骨體相當於第1、2肋間隙位置。腰椎棘突穿刺點,位於腰椎棘突突出處。
b、方法 :
1) 常規消毒,戴無菌手套,覆蓋無菌洞巾,用2%利多卡因作局部皮膚,皮下及骨膜麻醉。
2) 將穿刺針固定器固定在適當的長度(胸骨穿刺約1.0釐米處,髂骨穿刺約1.5釐米處)。用左手食指和中指固定在穿刺部位,以右手持針向骨面垂直刺入(胸骨穿刺則應保持針體與骨面成30°;-40°;角),當針尖接觸骨質後則將穿刺針圍繞針體長軸左右旋轉,緩緩鑽刺骨質,當感到阻力消失,且穿刺針已固定在骨內時,表示已進入骨髓腔。
3)拔出針芯,放於無菌盤內,接上乾燥的10 ml或20 ml注射器(注射器筒壁應用肝素或EDTA抗凝劑潤管),用適當力量抽取,即有少量紅色骨髓液進入注射器中,骨髓吸取量以需要量為宜。抽出的標本移入相應抗凝管保存。 ;
4)將抽取的骨髓液滴於數張載玻片上,數張分別送驗有核細胞計數,形態學及細胞化學染色檢查。 ;
5)抽吸完畢,將針芯重新插入;左手取無菌紗佈置於針孔處,右手將穿刺針連同針芯一起拔出,隨即將紗布蓋於針孔上,並按壓1~2分鐘,再用膠布固定紗布。
3.注意事項 ;
a、作出凝血檢查,有出血傾向者操作進應特別注意,血友病者禁忌。 ;
b、穿刺針必須乾燥,以免發生溶血。 ;
c、針頭進入骨質後,避免擺動過大,以免折斷;胸骨穿刺不可用力過猛,以防穿透內側骨板。 ;
d、抽取液量如作細胞形態學檢查不易過多。 ;
e、如懷疑有敗血症,則於塗片後,再接上注射器抽取骨髓液1.0 ml送骨髓培養。 ;
f、骨髓液抽取後應立即塗片,否則會很快凝固,使塗片失敗。 ;
g、收集標本後,必須立即送檢。標本運輸及實驗前存放:低溫條件2-8℃。
三、血液病融合基因定性、定量、突變送檢標本
1、要求採用骨髓標本的檢測項目,按常規骨髓採集方法採集骨髓2-3 ml(無菌操作),置於EDTA抗凝管(紫蓋)內,迅速顛倒數次以防止標本凝固。嚴禁使用肝素抗凝,因其對PCR擴增有抑制,且很難在核酸選取過程中完全去除。
2、4℃冷藏保存,最好24小時內送達。
3、請填寫特殊申請單,並附初步診斷、化療史、病史、治療史及骨髓細胞學檢查、外周血常規及細胞學檢查結果。
4、骨髓標本無法取得,醫生希望通過外周血檢查瞭解病情。外周血標本要求:2-3 ml外周血,EDTA抗凝(紫頭管),白細胞數>;5×;109/L,原始細胞或异常細胞達到20%以上。但由於骨髓中細胞總數及异常細胞數均大於外周血,此種情況下,報告結果可能不能如實反映疾病情况,報告的參攷價值需要醫生酌情考慮。請醫生詳細填寫申請單,請附初步診斷、化療史、病史、治療史及骨髓細胞學檢查、外周血常規及細胞學檢查結果。
5、全血或骨髓標本如用於DNA選取檢測,可4℃下短期保存;如用於RNA檢測,則應在取血後儘快送達,否則RNA易於降解。
6、如遇凝血、溶血、經過高溫或冷凍的標本以及採用其它方法抗凝的標本,均為不合格標本,需要重新採集;標本要求無菌、運送時注意不要貼近冰袋。
四、血液病流式平臺相關檢測項目送檢標本
1、骨髓標本要求
1.1、要求採用骨髓標本的檢測項目,按常規骨髓採集方法採集骨髓2-5 ml(無菌操作),置於肝素抗凝管(綠蓋)或EDTA抗凝管(紫蓋)內,輕輕顛倒混勻以防止標本凝固。
1.2、4℃冷藏保存,48小時內送檢。
1.3、請填寫特殊申請單,並附初步診斷、化療史、病史、治療史及骨髓細胞學檢查、外周血常規及細胞學檢查結果。
1.4、存在凝血、溶血、細胞計數太低(低於1×;105個/ml)、經過高溫或冷凍的標本以及採用其它方法抗凝的標本,均為不合格標本,需要重新採集;標本要求無菌、運送時注意不要貼近冰袋。
1.5、有骨髓形態學報告的請附報告,無報告的請附骨髓塗片(白片)。
1.6、請詳細填寫檢測申請單,微小殘留檢測請附初診時免疫分型檢測結果。
2、外周血標本要求
2.1、靜脈采血3-5 ml,置於肝素抗凝管(綠蓋)或EDTA抗凝管(紫蓋)內,輕輕顛倒混勻。
2.2、4℃冷藏保存,48小時內送檢。
2.3、存在凝血、溶血、細胞計數太低(低於1×;105個/ml)、經過高溫或冷凍的標本以及採用其它方法抗凝的標本,均為不合格標本,需要重新採集;標本要求無菌、運送時注意不要貼近冰袋。
五、血液病遺傳平臺相關檢測項目送檢標本
1、骨髓標本要求
1.1、要求採用骨髓標本的檢測項目,按常規骨髓採集方法採集骨髓3-5 ml(無菌操作),置於肝素抗凝管(綠蓋)內,迅速顛倒數次以防止標本凝固。嚴禁使用EDTA抗凝。
1.2、4℃冷藏保存,最好24小時內送達,最長不超過48小時。
1.3、請填寫特殊申請單,並附初步診斷、化療史、病史、治療史及骨髓細胞學檢查、外周血常規及細胞學檢查結果。
1.4、骨髓標本無法取得,醫生希望通過外周血檢查瞭解病情。外周血標本要求:3-5 ml外周血,肝素抗凝(綠頭管),白細胞數>;5×;109/L,原始細胞或异常細胞達到30%以上。但由於骨髓中細胞總數及异常細胞數均大於外周血,此種情況下,報告結果可能不能如實反映疾病情况,報告的參攷價值需要醫生酌情考慮。如果檢測目的是療效監測,用外周血標本則毫無意義。請醫生詳細填寫申請單,請附初步診斷、化療史、病史、治療史及骨髓細胞學檢查、外周血常規及細胞學檢查結果。
1.5、如遇凝血、溶血、經過高溫或冷凍的標本以及採用其它方法抗凝的標本,均為不合格標本,需要重新採集;標本要求無菌、運送時注意不要貼近冰袋。
2、外周血標本要求
2.1、靜脈采血5 ml以上,置於肝素抗凝管(綠蓋)內,輕輕顛倒混勻;對白細胞數沒有特殊要求,但也不能低過正常範圍(4.0×;109/L-10.0×;109/L)。
2.2、4℃冷藏保存,24小時內送檢。
2.3、如遇標本高凝狀態、溶血、細胞脆性强、細胞計數低、經過高溫或冷凍的標本以及採用其它方法抗凝的標本,均為不合格標本,需要重新採集;標本要求無菌、運送時注意不要貼近冰袋。
2.4、請醫生詳細填寫申請單,請附初步診斷、病史、外周血常規檢測結果。
实体瘤标本的采集与处理
一、基因突變送檢標本
石蠟標本
用於檢測腫瘤組織的體細胞突變(somatic mutation)。為了保證石蠟標本中基因組DNA選取的成功率和正常的檢測週期,請按照如下要求準備送檢標本:
1.切片厚度5-10mm,切片數量取決於腫瘤組織橫切面的大小。例如:對於成人拇指蓋大小面積,6~8張切片即可滿足DNA選取需要;如果腫瘤組織切片的面積較小,請按比例新增切片的數量。
2.為保證切片組織中含有足够比例的腫瘤細胞,需請病理科事先對該切面的腫瘤組織進行HE染色,確保所切層面中腫瘤組織占70%以上、且壞死組織比例少於10%。如無條件,也可以同時送檢一張相鄰切面的白片,由我們代為檢測。
3.切片結束後,不必進行鋪片和貼片處理,直接用乾淨的鑷子將組織切片轉移至乾淨的1.5 ml離心管中。
4.請盡可能在送檢時請提供兩管待測標本,其中一管用於檢測,另一管作為備用資料。
5.標本常溫保存、運輸。
6.為保證石蠟標本DNA選取的成功率,請盡可能送檢2~3年以內的石蠟標本。
新鮮組織標本
用於檢測腫瘤組織的體細胞突變(somatic mutation)。
1.要求新鮮腫瘤組織標本≥100mg,未壞死腫瘤組織比例在70%以上。
2.術後首先用生理鹽水洗2次組織塊,然後將適當大小的腫瘤組織置於貼有標籤的凍存管內,迅速冷凍,8小時內低溫條件(用冰盒)送達;如無法及時運送,則必需於離體20分鐘內寘於液氮或-70℃冰柜保存,兩周內於低溫條件下送達。
3.也可以將活檢或手術切除的腫瘤組織置於10%中性福馬林溶液中(固定時間不超過4小時),固定的組織標本可以常溫保存、運輸。
外周全血標本
外周全血用於檢測患者的種系突變(germinal mutation)或個體的基因多態性(SNP)。
1.靜脈采血3-5 ml,置於EDTA抗凝管(紫蓋)內,輕輕顛倒混勻。
2.必須注意抗凝劑的選擇,一般使用EDTA-Na2、草酸鉀或枸椽酸鈉,嚴禁使用肝素,因其對PCR擴增有抑制,且很難在核酸選取過程中完全去除。
3. 4℃冷藏保存,24小時內送達。
4.如果外周全血採集後不能及時送達,最好不要直接凍存於-20℃。建議製備成外周血單個核細胞(PBMC),主要有兩條途徑,一是使用淋巴細胞分離液分離製備;二是使用紅細胞裂解液,裂解全血中的紅細胞,經生理鹽水數次洗滌,即可在管底得到單個核細胞。這種外周血單個核細胞如暫不選取核酸,可較長期地保存於-20℃冰柜。
血漿標本
血漿標本主要用於血漿腫瘤游離DNA檢測。
1.靜脈采血3-5 ml(無菌操作),置於EDTA抗凝管(紫蓋)內,室溫靜止30分鐘,3000 rpm離心10分鐘,取上清於乾淨的離心管中。
2. 4℃冷藏保存,24小時內送達。
3.如不能及時送達,血漿標本可在-20℃下短期(1~2周)保存,較長期保存應在-70℃下;注意避免反復凍融的剪切力破壞DNA,凍存的血漿標本在日後送檢時需要盡可能地在低溫條件下(用冰盒)送達。
4.如無條件離心時,也可以等同於外周全血送檢要求,置於EDTA抗凝管內4小時內儘快送達,由我們代為分離血漿。
體液(胸水)標本
對於惡性腫瘤患者的體液標本(例如肺癌患者的惡性胸水),在離心獲得其中的腫瘤細胞之後,其中大部分為腫瘤組織來源的脫落細胞,可以用於檢測腫瘤組織中的體細胞突變。這對於一些術後復發或晚期轉移、沒有手術機會的腫瘤患者具有非常重要的意義。
1.常規胸腔穿刺抽取胸水等體液標本後,輕輕注入收集容器中,穿刺術後靜置2小時,取靠近容器底部的胸水10~15 ml,置於密閉的離心管或玻璃瓶中。
2. 4℃冷藏保存,24小時內送達。
二、FISH檢測送檢標本
新鮮組織
1.組織需用中性福馬林固定,常溫保存,標本固定時間不超過4天。如果固定時間超過4天,我們會要求送檢組織簽署一份試做申請或重新送樣。
2.送檢組織應是癌組織,我們會通過HE染色對送檢標本進行質檢,若送檢標本出現無癌細胞、癌細胞小於計數量或者癌細胞大量壞死的情况,我們會通知送檢醫院,由送檢醫院决定是否重新送樣或進行退檢處理。
3.標本置於中性福馬林固定液中,常溫48小時之內送達。
石蠟塊
1.送檢醫院病理科需採用中性福馬林固定組織,且標本固定時間不超過4天。如果固定時間超過4天,我們會要求送檢組織簽署一份試做申請或重新送樣。
2.送檢蠟塊應是癌組織蠟塊,我們會通過HE染色對送檢標本進行質檢,若送檢標本出現無癌細胞、癌細胞小於計數量或者癌細胞大量壞死的情况,我們會通知送檢醫院,由送檢醫院决定是否重新送樣或進行退檢處理。
3.請在送檢申請單上的顯著位置注明固定液的種類,固定的時間,常溫保存、運輸。
石蠟切片
1.送檢醫院病理科需採用中性福馬林固定組織,且標本固定時間不超過4天。如果固定時間超過4天,我們會要求送檢組織簽署一份試做申請或重新送樣。
2.切片厚度不超過4μm,必須使用“+”片或者是免疫組化專用防脫玻片(APES玻片),因為普通白片在檢測的過程中可能出現脫片現象,導致FISH檢測的失敗。如果送檢的切片為普通白片,我們會要求送檢組織簽署一份試做申請。
3.1p/19q FISH檢測要求6張“+”片,1張白片;其他的實體瘤FISH檢測項目要求4張“+”片,1張白片。
4.送檢組織應是癌組織,我們會通過HE染色對送檢標本進行質檢,若送檢標本出現無癌細胞、癌細胞小於計數量或者癌細胞大量壞死的情况,我們會通知送檢醫院,由送檢醫院决定是否重新送樣或進行退檢處理。
5.請在送檢申請單上的顯著位置固定液的種類,固定的時間,切片的厚度。
6.將切片穩妥放置於專業的切片盒內,常溫保存、運輸。
尿液
1.送檢標本為新鮮尿液,不少於200 ml,取出後與保存液按如下比例混合:尿液:保存液* = 2:1(V/V),常溫保存。
2.若在檢測過程中發現送所尿液中的脫落細胞過少,無法達到計數要求,我們會通知送檢醫院,由送檢醫院决定是否重新送樣或進行退檢處理。
3.標本常溫保存、72小時之內送達。